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如何縮小ELISA試劑盒的試驗誤差?

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  在ELISA試劑盒的操作過程中,我們除了需要多點細心之外,還有一些需要重點注意的地方,下面我們來仔細說說。
 
  方面一:檢驗技師
 
  應具備從事實驗室操作的基本素質和實踐經驗。能熟練操作實驗儀器、器械,具有一定總結和分析問題的能力,對實驗中出現的意外情況能及時妥善解決。
 
  方面二
 
  使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。
 
  方面三:仔細閱讀說明書
 
  嚴格按照說明書要求進行規范化操作。ELISA試劑盒不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方,反復試驗確定成立后才能改進。
 
  方面四:洗滌徹底
 
  洗板不徹底,酶結合物本底顯色會呈現假陽性。洗滌液要新鮮,現用現配,陳舊的洗滌液會出現本底增高現象,也可能出現假陽性。
 
  方面五:嚴控反應時間
 
  反應時間過長,酶失活;反應時間過短,酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合,生成物結構松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。
 
  方面六
 
  注意ELISA試劑盒保存期,過保存期的試劑不能使用。
 
  方面七:評估試劑的實用性
 
  試劑的穩定與否,對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用。
 
  方面八:嚴格掌握顯色時間
 
  顯色時間過短,加入終止液反應終止后,底物結合物的量過少,易出現假陰性。超過顯色要求時間后顯色,應判為假陽性,這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色,不可報陽性,這可能是本底顯色的結果。
 
  方面九:加樣要準確、快速
 
  如果加樣不準確,酶生成物的量不能確定,ELISA試劑盒直接影響顯色結果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關,所以加樣應慎重。要求在一定時間內加樣完畢的實驗,如果加樣遲緩,便出現誤差,而且試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效。
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