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技術文章

cfDNA采血管具有哪些穩定性?

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  cfDNA采血管可實現全血采集樣品中cfDNA規范化(標準化)??捎糜跓o創產前基因篩查/無創產前基因檢測(NIPS/NIPT)和液體生物監測的規范化,提高檢驗結果的準確性。
 
  1. 時間穩定性
 
  采集的全血,其Cell-free DNA可以在室溫(22?C) 下能穩定保存長達28天!
 
  結論來自如下監測:在不同時間下,對室溫保存在CFGenome的Blood Exo DNA ProTeck? tubes中的血液,取血漿使用droplet digital PCR檢測β-Actin基因片段,用以反映cell-free DNA濃度,發現與初始采集時比較,保存長達28天后該基因沒有發生顯著改變。而K3EDTA采血管無法實現在室溫下的長時間保存。在第3天,β-Actin已經呈現顯著升高,cell-free DNA濃度持續升高,至28天時,濃度升高上千倍之多。
 
  2. ctDNA穩定性
 
  Blood Exo DNA ProTeck? tubes保存血樣,血液中的腫瘤DNA室溫(22?C)穩定保存28天。
 
  該結果來自于對野生型KRAS DNA濃度的檢測:Blood Exo DNA ProTeck? tubes能讓血液中的KRAS DNA室溫(22?C)穩定保存28天,而K3EDTA保存管無法實現。
 
  將來源于細胞系的已知量的KRAS外顯子2 G13D突變的腫瘤cell-free DNA作為內參照加入到采集的血樣中,使用therasreen KRAS RGQ PCR試劑盒和Rotor Gene real time PCR儀檢此內參。在K3EDTA采血管保存的血樣中,發現僅在采集日可以檢出,而Blood Exo DNA ProTeck? tubes中保存的血樣,22°C下保存28天依舊可以檢出。
 
  3. 溫度穩定性
 
  使用CFGenome的Blood Exo DNA ProTeck? tubes采集的全血在4?C到30?C間都能保持cell-free DNA穩定。
 
  無論使用Qubit? dsDNA HS檢測法,還是使用droplet digital PCR檢測RASSF1A,在CFGenome的Blood Exo DNA ProTeck? tubes中,6?C, 22?C或37?C三種保存溫度下保存的血液,直到第7天cell-free DNA濃度都沒有顯著改變。
 
  4. 運輸穩定性
 
  使用CFGenome的Blood Exo DNA ProTeck? tubes采集保存的血樣能經受42?C溫度,不影響血中cell-free DNA濃度。
 
  實驗方法:將ProTeck采血管采集的血樣,通過FedEx運輸往哥倫比亞,亞利桑那等地,經受兩天42?C,與室溫保存的樣品比較cell-free DNA濃度沒有顯著改變,而在K3EDTA管中保存的血樣cell-free DNA濃度顯著升高(droplet digital PCR技術檢測β-Actin基因片段)。
 
  5.甲醛檢測
 
  NMR檢測顯示CFGenome的Blood Exo DNA ProTeck? tube不含甲醛。
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