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技術文章

如何判斷及避免ELISA試劑盒的基質效應?

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  ELISA試劑盒在ELISA試劑盒實驗中,有時會遇到樣品濃度挨近試劑盒的靈敏度就容易發生樣本OD450值低于空白值的現象,特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質效應導致的結果。
 
  基質是指樣品中目標分析物以外的部分。由于基質成分會對分析過程有顯著干擾,影響分析結果的準確性。業內把這些影響統稱為基質效應。這是ELISA試劑盒開發和使用中需要避開的雷。
 
  1.否是基質效應的判斷:
 
  當單個樣本或少量樣本值低于空白值時,可能是實驗操作出現問題,這時應增加重復,進步操作技術。當許多樣本都低于空白值時,應思考基質效應的影響,建立校正曲線予以修改?;|效應的原因錯綜復雜,有可能是樣品中存在的基質導致原抗體的聯絡結合能力下降,便產生了樣本值低于空白值的現象。導致樣本值無法計算出數值,或許數值為負。
 
  雖然原因復雜,但有方法可以用來評估基質效應。
 
  一是采用線性稀釋,一般來講,抗原和捕獲抗體、檢測抗體之間的結合作用很強,樣品濃度被稀釋并不影響它們的結合,而造成基質效應的非特異結合的力要弱很多,如果不斷稀釋樣品,非特異結合造成的干擾會逐步減少,測量值也更接近真實值。沒有基質效應時,無論如何稀釋,測量值都和真實值吻合。而有基質效應時,稀釋會造成非特異性結合比例的減少,測量值也相應地產生很大改變。
 
  二是摻入回收率實驗,將低、中和高濃度的分析物摻入到已測定過濃度的樣本中,摻入前后實測到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率,回收率以百分比的形式呈現?;厥章式橛?0-120%,才符合標準。
 
  2.避免ELISA實驗中基質效應的方法:
 
  基質效應可以通過產品研發階段的優化盡可能去消除的。ELISA試劑盒在開發進程中,標準品不選用人或動物血清、血漿作為標準曲線的稀釋液,只能選用其仿照物。量身定制的緩沖液系統,這些優化后的緩沖液體系能很好消除基質效應。還有當檢測某個分析物時,其他相關因子或類似結構因子如果有非特異性結合,也會導致基質效應,我們也因此做了大量的交叉反應,確保沒有明顯的交叉反應和干擾。而且我們試劑盒必須通過嚴格的基質效應測試,全部包括線性稀釋和摻入回收率實驗,并把測試結果記錄在說明書中。
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