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技術文章

唾液酸分析指南,Ludger可提供唾液酸分析服務

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唾液酸分析指南如下,Ludger公司可以提供唾液酸分析的技術服務


NeuAc(唾液酸)和NeuGc(神經氨酸)的定量分析是監管機構在生物制藥表征的產品標準規格指南中提出的一個要求。特別是,人類和非人類的唾液酸 (NeuAc / NANANeuGc / NGNA分別)相對水平測定是非常重要的,因為有些病人有高水平的抗神經氨酸(anti-NeuGc)抗體,這可導致中和反應和快速清除含有神經氨酸(NeuGc)的生物藥品 (Nguyen,2005)。


由于唾液酸(NeuAc)和神經氨酸(NeuGc)在分析糖蛋白中具有重要意義,它通常被認為是生物治療藥物的關鍵質量屬性(CQA)。


較廣泛的唾液酸(NeuAc)和神經氨酸(NeuGc)比例確定方法是如下:

    1. 通過輕度酸水解放糖蛋白上的唾液酸殘基。

    2. 用1-1,2 - 二氨基-4,5 - 亞甲基苯酚(DMB)熒光標記釋放的唾液酸。

    3. 通過液相色譜法(HPLC)或超液相色譜法(UHPLC)對DMB標記的唾液酸進行相對定量分析。


LudgerDMB標記試劑盒(貨號:LT-KDMB-A1),提供從糖蛋白釋放唾液酸并用DMB標記的所有功能。該試劑盒包含可以檢測高達22個糖蛋白樣品(每樣品含50-100 μg糖蛋白)的試劑和材料。每個標記可標記每個樣品中大約10 pmol2.5 nmol的唾液酸。

    

試劑盒中包含一系列唾液酸的參考標準品(含Neuc,Neu5Gc,Neu5,7Ac2,Neu5,Gc9Ac,Neu5,9Ac2,Neu 5,7,8),9Ac3Gc),以及NeuAcNeuGc的定量標準品。這三個標準品可以隨著釋放的唾液酸樣品進行DMB標記。


系列稀釋液制備后的NeuAcNeuGc定量標準品可用于定量分析。LudgerTag?DMB試劑盒中有提供關于如何制備的說明. 如有需要NeuAcNeuGc定量標準品也可在另行購買,請跟我們。


作為陽性對照,我們建議使用包含NeuAcNeuGc唾液酸的胎球糖蛋白,我們同樣建議使用zui純化的LudgerBioQuantTM糖肽標準品來作為陽性對照。這個糖肽標準品(貨號: BQ-GPEP-A2G2S2-10U)是一個復雜的N-連接雙觸角聚糖,終止于兩個N-乙酰神經氨酸。


使用此標準品可以檢查聚糖釋放、標記和回收的有效性,并可增強您的唾液酸測量準確性。Ludger還銷售可用于識別Neu5,9Ac2的標準品。水可以作陰性對照。


1:由LS-UR2 UHPLC色譜柱(貨號LS-UR2-2.1x100)分析出來的DMB-標記唾液酸對照品。

為了檢測聚糖的分離該對照品也可以作為跑樣之前的系統適用性標準品。



唾液酸分析相關產品

商品型號

英文品名

中文品名

包裝

LT-KDMB-A1

DMB Sialic Acid Labeling Kit

DMB 唾液酸釋放標記試劑盒

1Reaction Set

LS-R1-4.6x150

Ludger Sep R1 HPLC Column

R1 HPLC 色譜柱-唾液酸

4.6 x150 mm

LS-UR2-2.1x100

Ludger Sep UR2 UHPLC Column–sialic acids

UR2 UHPLC 色譜柱-唾液酸

2.1 x 100 mm

CM-NEU-AC-01

N-acetylneuraminic acid quantitative standard

N-乙酰神經氨酸定量標準品

1 nmol

CM-NEU-GC-01

N-glycolyneuraminic acid quantitative standard

N-羥乙酰神經氨酸定量標準品

1 nmol

CM-NEU5,9,AC-01

N-acetylneuraminic acid qualitative standard

N-乙酰神經氨酸定性標準品

1 nmol

BQ-GPEP-A2G2S2

A2G2S2 glycopeptide standard

A2G2S2 糖肽標準品(用于唾液酸釋放和標記過程)

10 μg

GCP-FET-50U-X4

Fetuin Glycoprotein (4 x 50 ug)

胎球糖蛋白(4×50微克)(唾液酸化陽性對照)

4 x 50 μg


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